lunes, 17 de octubre de 2011

DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES.


INTRODUCCION:
Existen diversos métodos para cuantificar el número de microorganismos presentes en muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, así como los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos sólidos o líquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimación por el método del Número Más Probable (NMP).
El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que también puede ser aplicado para la determinación de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este método es aplicable para estimar el número de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminación fecal. Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.




OBJETIVO
Detectar bacterias coliformes totales y fecales.
Detectar si la muestra traída es apta para el consumo humano




METODO

SERIES DE 3 TUBOS
1. DISOLVER LA CANTIDAD EN GRAMOS DE CALDO LACTOSADO (CL) 6.5 GRAMOS DE CALDO LACTOSADO EN EL VOLUMEN DE AGUA DESTILADA DE ACUERDO A LAS INSTRUCIONES DEL FABRICANTE, SI ES NECESARIO, CALENTAR EN PARILLA ELECTRICA Y USAR AGITADOR MAGNETICO.
2. LLENAR LOS TUBOS DE ENSAYE CONTENIENDO EL TUBO DE FERMENTACION INVERTIDO HASTA UN NIVEL LIGERAMENTE POR ENCIMA DEL TUBO DE FERMENTACION.
3. ASEGURARSE QUE LOS TUBOS DE FERMENTACION INVERTIDOS ESTEN LLENOS EN SU TOTALIDAD DE CALDO, INVIRTIENDO SUCESIVAMENTE LOS TUBOS DE ENSAYE.
4. CERRAR LOS TUBOS CON SU TAPON DE ROSCA, DE FORMA QUE NO QUEDE MUY APRETADO. COLOCAR LOS TUBOS DE ENSAYE EN CRISTALIZADORES.
5. ESTERILIZAR LOS TUBOS A 121ºC POR 15 MIN.A 15 LIBRAS DE PRESION. ENFRIAR Y GUARDAR EN REFRIGERACION HASTA SU USO.
6. A TRES TUBOS AGREGAR 10ML DE MUESTRA PROBLEMA; A OTROS TRES AGREGAR 1ML Y A OTROS AGREGAR 0.1ML CON PIPETAS ESTERILES.
7. INCUBAR LOS TUBOS A 35ºC POR 24-48 HRS. LEER LOS TUBOS A LOS 24 Y 48 HRS. ANOTAR LOS TUBOS POSITIVOS DE CADA SERIE (AQUELLOS TUBOS QUE PRESENTAN GAS O AIRE DENTRO DEL TUBO DE FERMENTACION SE CONSIDERAN POSITIVOS).
8. RESEMBRAR POR MEDIO DE ASADA LOS TUBOS POSITIVOS EN TUBOS DE ENSAYE CON TUBOS DE FERMENTACION CONTENIENDO CALDO EC (LOS TUBOS DE CALDO EC SE PREPARAN SIMILAR A LOS DE CL).
9. INCUBAR LOS TUBOS SEMBRADOS DE CALDO EC A 44.5ºC POR 24 HRS. CONTAR LOS TUBOS POSITIVOS DE CADA SERIE ( POSITIVO=PRESENCIA DE GAS EN EL TUBO DE FERMENTACION ) Y ANOTAR LOS RESULTADOS 18.5 EN 500ML.
10. POR MEDIO DE UNA TABLA DE NUMERO MAS PROBABLE PARA SERIES DE TRES TUBOS, DETERMINAR EL NUMERO MAS PROBABLE DE COLIFORMES FECALES/100ML DE MUESTRA PROBLEMA.










10ml
1ml
0.1ml
NMP colif. Tota.
10ml
1ml
0.1 ml
NMP coiformes fecales
MUETRA DE AGUA
3
3
2
1.100
3
3
0
240
MANEADERO
3
3
3
2400
3
3
3
4800
ACUICULTURA (ARTEMIOS)
3
3
3
2400
3
3
3
4800
PEDREGAL-PLAYITAS
3
3
3
2400
3
2
1
150
CHAPULTEPEC (MAR)
CAÑON DOÑA PETRA
3
3
3
2400
1
2
3
NO DETERMINADO
INVERNADERO
3
3
3
2400
3
3
3
4800
SAUZAL (MAR)
3
3
3
2402
3
0
0
23


CONCLUCION

Podemos concluir con respecto a los objetivos antes relacionados que la determinación de bacterias coliformes fecales y totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos como en los sistemas de agua potable, ya que estos microorganismos se pueden transmitir a través de las heces fecales.
La mayoría de los enterococos, estreptococos y demás grupos o géneros microbianos son algunos patógenos y no patógenos, de estos se pueden preparar fermentaciones, que mediante un largo proceso, llegan a ser elaboradas en productos comestibles, garantizando al consumidor la mayor seguridad al consumir ese producto fermentado.
BIBLIOGRAFIA
García, Monses. Microbiología de los Alimentos. Pág. 144-148. y otros.
J.M. J.A.Y. Microbiología Moderna de los Alimentos Pág. 301-306 y otros
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domingo 25 de septiembre de 2011

1.- ¿Cuál de los siguientes hechos no formó parte de la controversia sobre la generación espontánea o abiogénesis?
a) Los hallazgos de Spallanzani (1769) sobre el calentamiento de infusiones en envases cerrados impedía la generación espontánea.
b) La teoría microbiana de las enfermedades expuesta por Koch en 1876.
c) Los experimentos de Pasteur en 1861 sobre infecciones estériles, microorganismos del aire y frascos con cuello de cisne.
d) Las observaciones de Redi (1665) sobre el crecimiento de gusanos en la carne en putrefacción.
e)
La esterilización del aire llevada a cabo por Schwann en 1837 como comprobación de ser la causa de contaminación de las infusiones estériles.
2.- Tuvieron un papel destacado en el desarrollo de la teoría microbiana de las enfermedades:
a) Pasteur con la demostración de que un protozoo era la causa de una enfermedad en los gusanos de seda.
b) Walter Reed con la demostración de transmisión por vectores de la fiebre amarilla.
c) Koch demostrando que la causa del carbunco era una bacteria.
3.- Escribe brevemente los postulados de Koch sobre las enfermedades infecciosas bacterianas: el agente patógeno debe estar en el enfermo. El microorganismo debe aislarse en el enfermo en cultivo puro. El microorganismo ya crecido en el cultivo puro, al entrar en contacto con animales sanos se produce la enfermedad en ellos. Con estos animales ya enfermos se puede volver aislar el microorganismo.
4.- Pueden ser considerados como microorganismos acelulares:
a) Los virus filtrables (Ivanowsky 1892) b) Los viroides (1967) c) Los priones(1981).
5.- La clasificación de organismos consta de tres Imperios: Archea, Bacteria y Eucaria. ¿Qué agrupaciones o reinos se incluyen dentro del imperio Archea?:
a) Metanógenas, Halófilas extremas y Termófilas
b) Bacteria y Cianobacterias
c) Hongos
d) Archezoa
e) Cromista
6.- En la práctica y desarrollo de la antisepsis fue personaje histórico:
a) Semmelweis (1843) introduciendo el Cloro en el lavado de manos
b) Lister (1864) utilizando fenol para desinfectar habitaciónes
c) Pasteur (1885) introduciendo la vacuna de la rabia.
7.- Señale cuales de los siguientes son postulados de Koch sobre las enfermedades infecciosas bacterianas:
a) El microorganismo productor tiene que estar en todos los enfermos y no en los sanos
b) El microorganismo tiene que cultivarse en el laboratorio en cultivo puro.
c) El microorganismo tiene que poderse ver al microscopio en fresco o teñido.
d) Mediante la inoculación de los microorganismos tiene que producirse experimentalmente la enfermedad en los animales de laboratorio
e) En los animales con la enfermedad experimental hay que aislar el microorganismo causal.
8.- ¿Cuál de los siguientes microorganismos posee naturaleza celular?
a) Viroides b) Arqueobacterias c) Priones d) Virus e) Ninguno de los anteriores
Centro de Estudios Tecnológicos del Mar en Ensenada, Prof. José Luis Peña Manjarrez Laboratorista Ambiental. Tercer Semestre. Análisis Biológicos del Agua. Tema 1. Microbiología. Cuestionario 1.
9.- ¿Cuál de las siguientes secuencias es la correcta?
a) Reino, Variedad, Orden, Género, Especie
b) Especie, Familia, Clase, Tribu, Reino
c) Familia, Orden, Clase, División, Reino
d) Reino, Clase, Familia, Especie, División
e) Subfamilia, Género, Subespecie, Subdivisión, Biovar
10.-¿Cuál de los siguientes acontecimientos relacionados con la Microbiología ha tenido lugar en época más reciente?
a) La teoría de la generación espontánea
b) El descubrimiento de los virus
c) El descubrimiento del microscopio electrónico
d) La aplicación de la taxonomía numérica
e) La erradicación de la viruela
Tema 2- Observación de los microorganismos: el microscopio, preparación y examen de muestras. 1.- El límite de resolución de un microscopio:
a) Disminuye al aumentar la longitud de onda de la fuente de iluminación
b) Aumenta al disminuir la apertura numérica del objetivo
c) Aumenta al aumentar el índice de refracción del medio
d) Aumenta al aumentar el ángulo de la luz que entra en el objetivo
2.- El límite de resolución de un microscopio:
a) Es inversamente proporcional al poder de resolución
b) Es inversamente proporcional a la apertura numérica del objetivo
c) Es directamente proporcional al índice de refracción del medio.
3.- Las técnicas de tinción en microscopía:
a) Aumentan el límite de resolución
b) Aumentan el contraste
c) Aumentan la apertura numérica
d) Evitan las aberraciones esféricas
e) Evitan las aberraciones cromosómicas
4.- Que tinción realizarías para comprobar la existencia de bacilos tuberculosos en el esputo de un paciente?:
a) Tinción de esporas
b) Tinción de Gram
c
) Tinción de Ziehl-Nielsen
d) Tinción de corpúsculos metacromáticos
5.- ¿Qué tipo de microscopio posee mayor poder de resolución?
e) Contraste de fases b) Fluorescencia c) Barrido d) De luz ultravioleta e) Óptico
6.- Las bacterias Gram negativas:
a) Se decoloran por alcohol-acetona
b) La coloración final de Gram es rojo
c) El espesor del peptidoglicano es menor (2nm) que en las Gram + (10-20nm)
d) Presentan una membrana externa con lípidos
7.- ¿Cual es el principal motivo por el que usarías un microscopio de fluorescencia?:
a) Para observar células en movimiento
b) Para observar virus
c) Para observar estructuras bacterianas
d) Para apreciar la forma de un microorganismo "in vivo"
e) Para realizar diagnóstico en clínica
Centro de Estudios Tecnológicos del Mar en Ensenada, Prof. José Luis Peña Manjarrez Laboratorista Ambiental. Tercer Semestre. Análisis Biológicos del Agua. Tema 1. Microbiología. Cuestionario 1.
8.- Después de añadir el alcohol (como decolorante) en la tinción de Gram, las células se verían:
a) Rojas las Gram negativas y azules las Gram positivas
b) Azules las Gram negativas y rojas las Gram positivas
c) Azules las Gram negativas y positivas
d) Incoloras las Gram negativas y azules las Gram positivas
e) Azules las Gram negativas e incoloras las Gram positivas
9.- En el microscopio electrónico de barrido:
a) Los virus no pueden verse debido a su pequeño tamaño
b) Se pueden observar microorganismos vivos
c) Los microorganismos se observan en tres dimensiones.
10.- En el microscopio electrónico de transmisión:
a) Los virus sí pueden verse a pesar de su pequeño tamaño
b) No se pueden observar microorganismos vivos
c) Los microorganismos se observan en tres dimensiones.
11.- Mediante el empleo del aceite de inmersión en un microscopio óptico, conseguimos:
a) Disminuir la apertura numérica del objetivo
b) Aumentar el límite de resolución del microscopio
c) Aumentar el poder de resolución del microscopio
d) Aumentar el contraste
e) Ninguna de las anteriores sirve para utilizar el aumento 100x, el problema con este lente es que hay que acercarlo mucho y puede dañarse si no hay aceite, ademas es tan curvo que la luz rebota y no podria verse mucho, el aceite de inmersion ayuda a refractar la luz a angulos en los que pueden incidir correctamente sobre el lente para que se pueda ver bien.
Tema 3: La célula Procariótica; Estructura y Función
1.- La cápsula de la célula procariota;
a) es constante
b) tiene un grosor inferior a 0.1 µm
c) confiere protección ante la fagocitosis
d) se tiñe con los colorantes habituales
2.- Son funciones del nucleoide:
a) La replicación del ADN y la segregación del cromosoma
b) La transcripción
c) La regulación e intervención en la traducción y en la transferencia genética.
3.- Son funciones de la membrana citoplasmática:
a) Actuar como biomembranas: transporte, barrera osmótica
b) Suplir la carencia de estructuras especializadas en reacciones energéticas
c) Secreción (descarga de desechos y productos)
d) Síntesis de estructuras y moléculas externas
e) Conferir rigidez a la bacteria.
4.- Los ribosomas bacterianos:
a) Son numerosos (18.000 por célula)
b) Tienen una composición de RNAr 60% y proteínas 40 %
c) Tienen unasubunidad grande de 70 S con 34 proteínas y RNA de 23 S.
5.- Los plásmidos:
a) Son ADN extracromosómico
b) De 100 a 1000 veces menor que el cromosoma con extremos engarzados (circular)
c) Confierenrasgos o características y no son necesarios para la supervivencia.
6.- Los cocos en cadena se denominan:
a) Micrococos b) Sarcinas c) Estafilococos
d) Estreptococos e) Diplococos.
Centro de Estudios Tecnológicos del Mar en Ensenada, Prof. José Luis Peña Manjarrez Laboratorista Ambiental. Tercer Semestre. Análisis Biológicos del Agua. Tema 1. Microbiología. Cuestionario 1.
7.- Las bacterias con una morfología en forma de coma reciben el nombre de:
a) Cocos b) Bacilos c) Espirilos
d) Vibrios e) Sarcinas
8.- La pared celular de las bacterias:
a) Es una estructura relativamente rígida debido al peptidoglicano
b) Es la envoltura más interna de la célula
c) Da forma a las bacterias y la protege de los cambios de presión.
9.- La composición y estructura del DNA en los procariotas es como en los eucariotas:
a) Se ajusta al modelo de Watson y Crick con una doble hélice de 20 nm
b) Tiene como residuos ácido fosfórico, pentosas, bases púricas (A, G) y bases pirimídicas (C, T)
c) Está distribuido en varios segmentos en lugar de una molécula única circular.
10.- El mesosoma:
a) Son formaciones membranosas y tubulares
b) Son más frecuentes en G + 4
c) Aumenta la superficie y la función de membrana así como la secreción de enzimas (penicilinasas)
d) Interviene en la división celular, replicación DNA y la unión al material nuclear.
11.- El citoplasma soluble:
a) Es una solución gelatinosa, densa
b) Tiene un alto contenido en agua (70 - 80 %)
c) No contiene moléculas disueltas (azúcares, aminoácidos, sales, etc.).
12.- ¿Cuál de las siguientes son funciones de la pared celular de los procariotas?:
a
) Conferir rigidez a la célula
b) Suministrar energía para el transporte activo por fosforilación oxidativa
c) Ser el punto de anclaje de bacteriófagos
13.- ¿Cuál de la siguiente no es una función de la membrana citoplasmática de las bacterias?
a) suministrar la energía para el transporte activo por fosforilización oxidativa
b) suministrar rigidez ala célula
c) ser una barrera osmótica
d) sintetizar o participar en la síntesis de la pared y de la cápsula
e) el formar mesosomas septales y laterales (función secretora).
14.- ¿Cuál de las siguientes no es una denominación para el núcleo de las bacterias?
a) Equivalente nuclear b) cromosoma bacteriano
c) nucleoplasma d) nucléolo e) nucleoide
15.- ¿Cuál de las siguientes no es una estructura de la espora bacteriana?
a) nucleoplasma excéntrico b) citoplasma duro y granuloso c) aparato de Golgi d) cortex con peptidoglicano e) exina con queratina.

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